Em formação

3.6: SIM Agar - Biologia


O meio SIM (sulfeto, indol, motilidade) é um exemplo de meio multitestes, ou seja, ele testa mais de um aspecto do metabolismo da bactéria por vez. Nesse caso, a produção de sulfeto de hidrogênio, a formação de indol e a motilidade.

Procedimento

  1. Obtenha uma profundidade de meio SIM.
  2. Usando uma agulha de inoculação, perfure o meio cerca de 2/3 do caminho para baixo e retire o mesmo caminho o mais rápido possível com seu organismo designado.
  3. Incube o tubo por pelo menos 48 horas.
  4. Após o período de incubação, examine seu tubo.

Interpretação

Sulfeto de hidrogênio (H2S) a produção é indicada por uma cor preta no meio.

A produção de indol é indicada por um anel vermelho na superfície das profundezas após a adição do reagente de Kovac.

A motilidade é indicada pela capacidade do organismo de "se espalhar" para longe da linha. Ou, todo o tubo pode parecer turvo quando comparado com um controle não inoculado. Se o organismo não tiver mobilidade, o crescimento aparecerá apenas ao longo da linha da facada.

Esquerda: H2S Positivo
Centro: Indol Positivo
Direita: Motilidade Negativa


P: Como é caracterizado o sistema respiratório em moluscos aquáticos? Que estrutura respiratória adaptativa.

R: Clique para ver a resposta

P: Em cavalos, a altura é controlada por uma dominância incompleta. Os dois alelos são altos (T) e curtos (T ').

R: Dominância incompleta é a condição em que nenhum dos alelos de um gene é capaz de mascarar a expressão.

P: Quais são os vários métodos de reprodução assexuada?

R: A reprodução assexuada é o fenômeno da produção de uma prole por um dos pais solteiros sem o.

P: Quais mudanças anatômicas ocorrem durante o infarto do miocárdio (MI), e qual é / são as consequências prováveis.

R: O infarto do miocárdio também é denominado como ataque cardíaco. O músculo cardíaco fica danificado quando há.

P: Qual é um exemplo de verme chato de água doce? Devido a esse habitat qual é o problema fisiológico que.

A: Flatworms pertencem ao filo Platyhelminthes. Os exemplos incluem vermes, planárias e tênias. .

P: O que é o experimento de flutuação de Luria-Delbrück?

R: As mutações são definidas como qualquer alteração na sequência de nucleotídeos que também altera o fenótipo do.

P: Qual é a equação química geral da fotossíntese? Por que essa equação não mostra claramente o.

R: Fotossíntese é o processo pelo qual as plantas verdes (autotróficas) fixam o CO2 na forma orgânica (glicose).

P: Os patógenos estreptocócicos pertencentes aos grupos testados também apresentam outras características importantes.

R: O estreptococo pertence à classe dos bacilos e ao filo Firmicutes. As espécies de Streptococcus são responsáveis.

P: O que você entende por fertilização dupla?

R: A fertilização é o processo de fusão dos gametas masculino e feminino para formar um zigoto. O zigoto então.


Princípio

Triptofano é hidrolisado por triptofanase para produzir três possíveis produtos finais indol, piruvato e amônia. A produção de indol é detectada pelo reagente de Kovac ou Ehrlich. O indol, se presente, combina-se com o aldeído no reagente para produzir um composto quinóide rosa a vermelho-violeta (se o reagente de benzaldeído for usado) ou um cor azul a verde (se o reagente de cinamaldeído for usado). A ausência de enzima resulta em nenhuma produção de cor (isto é, indol negativo). Reação de teste de indol

O teste de indol é um teste bioquímico comumente usado e ajuda a diferenciar Enterobacteriaceae e outros gêneros.


Princípio do teste de indol

No teste de indol, o crescimento de bactérias é induzido em um meio rico em triptona. Algumas bactérias possuem uma enzima triptofase intracelular que resulta na desaminação do triptofano em três produtos finais, a saber indol, Ácido pirúvico e amônio.

A hidrólise do triptofano ocorre pela remoção do amina (NH2) grupo e a adição de agua. A adição de Kovacs e reagente local confirma a produção de indol em um tubo convencional e método local de indol, respectivamente.

O método Spot Indol utiliza o reagente p-Dimetilaminocinamaldeído que se acopla ao indol para produzir um complexo de cor azul. Em um método convencional, o reagente de Kovacs ou 4 (p) -dimetilaminobenzaldeído acopla-se com o indol para desenvolver um composto de cor vermelha ou rosindole.

Indole Test Media

O teste de indol geralmente emprega um único meio de teste, como “Caldo de triptofano”E uma mídia de teste combinada como“SIM”. Usando o caldo de triptofano, só pudemos distinguir entre os organismos indol positivo e indol negativo.

Em contraste com isso, SIM (Sulfide Indol Motility) é um meio de teste combinado, que diferencia os microrganismos com base em seus H2S Produção, indol produção e motilidade.

A composição do caldo triptona requer:

  • Triptona: 10g
  • Cloreto de Sódio: 5g
  • Água destilada: 1L
  • pH: 7,5 0,2 (a 25 graus Celsius)

A composição da mídia SIM requer:

  • Triptona: 20g
  • Peptona: 6,1g
  • Agar: 3,5g
  • Fe (NH)2(TÃO4)2.6H2O: 0,2g
  • N / D2S2O3.5H2O: 0,2g
  • Água destilada: 1L
  • pH: 7,5 0,2 (a 25 graus Celsius)

Para inocular a cultura bacteriana na mídia de teste, devemos selecionar colônias isoladas de qualquer um dos meio não seletivo adicionado com uma quantidade suficiente de triptofano.

Reagente de teste de indol

Reagente Indole Kovacs: Os componentes do reagente de Kovacs indol para preparar 100 ml de uma solução incluem:

  • 4 (p) -dimetilaminobenzaldeído: 5 g
  • Álcool amílico: 75 ml
  • Ácido clorídrico concentrado: 25 ml
  • Água destilada: 100 ml

Reagente de mancha de indol: Os componentes do reagente de mancha de indol para preparar 100 ml de uma solução incluem:

  • (p) -Dimetilaminocinamaldeído: 1,0 g
  • Ácido clorídrico concentrado: 10,0 ml
  • Água destilada: 100 ml

Métodos e Procedimentos

Dois métodos comuns diferenciam os organismos com base na produção de indol, a saber:

Método Spot Indole

Procedimento: Inclui as seguintes etapas:

  1. Sature o papel de filtro Whatman no.1 com o reagente de indol spot.
  2. Deixe secar por alguns minutos.
  3. Adicione um pouco de inóculo bacteriano através de um aplicador de madeira de qualquer meio não seletivo rico em triptofano, como meio de ágar sangue.
  4. Esfregue o inóculo ou prepare um esfregaço bacteriano fino sobre a zona saturada de reagente.
  5. Observe o papel de filtro após 3-5 minutos para o aparecimento de um zona de cor azul.
Interpretação do resultado
  • Resultado positivo: Aparece uma cor azul esverdeada sobre o esfregaço bacteriano.
  • Resultado negativo: Um papel de filtro permanece incolor.

Limitações
  • O teste de indol local é um menos sensível método.
  • O inóculo deve ser retirado de um colônia isolada para prevenir a difusão do indol.
  • Uma cultura bacteriana deve ser incubada aerobicamente.
  • Uma cultura deve ser tirada do sem glicose médio, pois pode quebrar rapidamente o indol.
  • Um inóculo isolado de meios seletivos como ágar MacConkey & # 8217s e ágar Eosin azul de metileno pode dar resultados errôneos.
  • As bactérias isoladas do ágar Mueller Hinton podem degradar o triptofano, causando hidrólise ácida de caseína.
  • Bactéria indol positiva fraca como Cardiobacterium hominis não pode ser examinado por este método.

Método Indol Convencional

Procedimento: Inclui as seguintes etapas:

  1. Prepare o caldo de triptona pesando com precisão os reagentes necessários.
  2. Depois de adicionar todos os componentes em um frasco cônico esterilizado, adicione uma quantidade apropriada de água estéril e autoclave a 121 graus Celsius em 15 psi de pressão por 15 minutos.
  3. Após a autoclavagem, despeje 5 ml de caldo de triptona em cada tubo de ensaio.
  4. Em seguida, inocule a cultura bacteriana pura através da alça de inoculação estéril.
  5. Incube os tubos de ensaio por pelo menos 24 horas a uma temperatura de 35 graus Celsius.
  6. Despeje 0,5 ml de reagente de Kovacs e observe um complexo de cor vermelha no topo da camada de álcool.
Interpretação do resultado

Resultado positivo: Desenvolve-se no topo uma cor vermelho cereja.
Resultado negativo: Um meio forma um composto incolor ou amarelo.

Limitações
  • Um método convencional de tubo leva muito tempo (mínimo de 24 horas) para conferir os resultados.
  • Ele não pode diferenciar entre as bactérias não fermentativas e anaeróbias, para as quais um reagente de Ehrlich atua como um substituto do reagente de Kovacs.
  • Durante uma reação, um composto “Skatole”Formulários que podem obscurecer a interpretação dos resultados.
  • Espécies de Clostridium quebra rapidamente o indol e dá resultados falsos.

Fatos importantes

O teste de indol diferencia os organismos que possuem a enzima triptofanase dos organismos que não possuem. A atividade da triptofanase causa a degradação do triptofano.

  • As bactérias que podem degradar o triptofano em indol têm a enzima triptofanase e são chamadas de “Bactéria indol positiva”. Exemplos de bactérias indol positivas incluem Aeromonas hydrophila, Bacillus alvei, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca etc.
  • Poucas bactérias carecem da enzima triptofanase em seu espaço intracelular e não conseguem dividir o triptofano em indol e são chamadas de “Bactéria indol negativa”. Exemplos de bactérias indol negativas incluem Proteus mirabilis, Pasteurella ureae, Bacillus sp, Enterobacter sp etc.

Triptofanase é uma enzima intracelular presente em algumas bactérias que usa triptofano e água como “Substratos" para produzir "Produtos”Como indol, ácido pirúvico e amônio. Pertence ao C-C liases família, que facilita o metabolismo do triptofano via fosfato de piridoxal e cofatores de potássio.

Indole (produto primário) é um composto heterocíclico aromático, que se forma como resultado da hidrólise do triptofano. A produção de indol pode ser visualizada adicionando alguma solução colorida como o reagente de Kovacs (para o método do tubo) e o reagente Spot (para o método do spot).


Diretrizes para aumentar o GPA

Não existe uma fórmula certa para aumentar o GPA de uma pessoa, e as estratégias que funcionam para uma pessoa podem não funcionar para outra. No entanto, existem algumas diretrizes comuns e hábitos de estudo que podem ser úteis ao tentar aumentar o GPA. As diretrizes abaixo são principalmente anedóticas e não pretendem ser uma forma segura de aumentar o GPA de alguém, mas geralmente são bons hábitos que podem ter efeitos positivos no aprendizado, o que pode, por sua vez, aumentar o GPA.

Participando ativamente das aulas:

Provavelmente, as aulas estão sendo pagas por um aluno ou por seus pais, e não comparecer às aulas é tanto uma perda financeira quanto uma perda potencial de educação. Embora um aluno possa decidir que assistir a uma determinada aula não é benéfico para seu aprendizado, ou não é um bom uso de seu tempo, mesmo que o professor seja muito ineficaz, geralmente há informações valiosas que podem ser obtidas simplesmente assistindo às aulas. O não comparecimento às aulas, por exemplo, pode resultar em efeitos negativos no GPA do aluno se, por algum motivo, o aluno perder informações sobre uma mudança no local ou no material do exame.

Além disso, embora possa ser verdade que os professores em grande parte repetem notas em sala de aula que muitas vezes são postadas em um site da Web, faltar às aulas pode resultar em oportunidades perdidas. As perguntas dos alunos em sala de aula, bem como as explicações que se seguem, podem fornecer informações aparentemente sem importância que podem, de fato, fazer uma grande diferença nos testes. Isso ocorre porque a interação com o professor e outros alunos pode aumentar a profundidade de conhecimento de uma pessoa sobre um assunto, ou pode fornecer a pequena dica necessária para solidificar a compreensão do aluno sobre um assunto.

Além disso, assistir às aulas, principalmente se a classe for menor, pode permitir que o professor associe um nome, um rosto e uma nota, principalmente se o aluno participar ativamente. Os professores que veem alunos atentos e envolvidos estão mais inclinados a entender qualquer problema potencial que possa surgir, como emergências que resultem em atrasos nas datas de entrega. Junto com isso, a participação ativa tem mais probabilidade de envolver a mente do aluno em relação ao assunto do que ler anotações online ou um livro didático, e pontos de confusão também podem ser esclarecidos no local. Isso pode, por sua vez, afetar a nota de uma pessoa e o GPA geral.

Planejamento:

Cada aluno tem seu próprio estilo de aprendizagem. Alguns gostam de trabalhar por horas a fio para completar uma tarefa, enquanto outros podem fazer muitas pausas. Não existe uma estratégia ideal, e como uma pessoa aborda o aprendizado é altamente dependente do estilo de aprendizado, bem como de aderir a uma estratégia de estudo que complemente sua programação e desejos. O método que maximiza o valor do tempo gasto é provavelmente o mais eficaz para melhorar o aprendizado e, subsequentemente, o GPA.

A organização do trabalho que precisa ser feito, assim como as anotações feitas também são importantes. É tão importante encontrar informações relevantes quanto fazer anotações em aula. As anotações são mais valiosas quando podem ser usadas para complementar o aprendizado. Os professores apresentam grandes quantidades de informações durante o curso de uma aula, e nem todas elas podem ser processadas pelo aluno. É importante praticar fazer anotações de uma maneira que permita ao aluno olhar para trás e aprender (ou procurar) as informações.

A gestão do tempo também é um aspecto importante do planejamento. Há apenas 24 horas em um dia, e nem todas uma pessoa pode usar com eficácia. Embora o aprendizado seja importante, fazer mais cursos ou atividades do que uma pessoa pode fazer pode ser prejudicial tanto para o aprendizado quanto para o GPA médio. Uma vez que todos os cursos tenham sido selecionados, o orçamento e a programação de tempo para cada curso podem ajudar a colocar em perspectiva a quantidade de trabalho e o tempo necessários. Embora a quantidade de trabalho necessária para uma série de cursos possa parecer inicialmente desanimadora, planejar como e quando abordar o trabalho para cada curso pode ajudar a reduzir o estresse e melhorar a eficiência, uma vez que o trabalho seja quantificado (ou pode ajudar uma pessoa a perceber que está enfrentando mais do que eles podem suportar).

Rever o trabalho regularmente, em termos de estudo, é outro aspecto da administração do tempo. Uma quantidade substancial de informações é coberta em um curso no momento do exame final, e revisar algumas das informações regularmente durante um período de tempo é freqüentemente mais eficaz do que tentar memorizar todas as informações logo antes de um exame. Aprender as informações por meio de revisão periódica pode, em última análise, economizar mais tempo de uma pessoa e, potencialmente, posicioná-la para um melhor desempenho em um exame e, assim, melhorar o GPA.


Usars

  1. Sulfeto Indol Motilidade (SIM) Meio: É um ágar semissólido usado para determinar a produção de sulfeto de hidrogênio (H₂S), formação de indol, e motilidade.
  2. Urease de indol de motilidade (MIU) teste: é usado para determinar a motilidade, a formação de indol e a produção de urease.

O teste de motilidade também é usado para a diferenciação de espécies de cocos gram-positivos, enterococos. Enterococcus faecium e E. faecalis são imóveis, enquanto E. gallinarum e E. casseliflavus / E. flavescens geralmente são móveis.

Observação: A incorporação de cloreto de tetrazólio em uma concentração final de 0,005% no meio é útil. O tetrazólio torna o ágar de motilidade muito mais fácil de ler para motilidade. O tetrazólio é incolor na forma oxidada, mas o sal reduzido é vermelho (ocorrendo como resultado do metabolismo bacteriano) e indica onde ocorreu o crescimento bacteriano.


3.6: SIM Agar - Biologia

2) CONTAGEM DE PLACA VIAVEL (PADRÃO)

A Contagem de Placas Viável (também chamada de Contagem de Placas Padrão) é um dos métodos mais comuns para enumeração de bactérias. Diluições em série de bactérias são semeadas em uma placa de ágar. O procedimento de diluição influencia o processo geral de contagem. A suspensão é espalhada sobre a superfície do meio de crescimento. As placas são incubadas para que as colônias sejam formadas. A multiplicação de uma bactéria em meio sólido resulta na formação de uma colônia macroscópica visível a olho nu. Presume-se que cada colônia surge de uma célula individual viável. O número total de colônias é contado e este número multiplicado pelo fator de diluição para descobrir a concentração de células na amostra original. As placas de contagem devem ter pelo menos 30-300 colônias. Uma vez que a enumeração de microrganismos envolve o uso de diluições extremamente pequenas e um número extremamente grande de células, a notação científica é usada rotineiramente em cálculos.

Uma das principais limitações deste método é a seletividade. A natureza do meio de crescimento e as condições de incubação determinam quais bactérias podem crescer e, portanto, ser contadas. A contagem viável mede apenas as células que são capazes de crescer no meio dado sob o conjunto de condições usadas para incubação. Às vezes, as células são viáveis, mas não podem ser cultivadas.

O número de bactérias em uma determinada amostra geralmente é muito grande para ser contado diretamente. No entanto, se a amostra for diluída em série e, em seguida, semeada em uma superfície de ágar de tal maneira que uma única bactéria isolada forme colônias isoladas visíveis, o número de colônias pode ser usado como uma medida do número de células viáveis ​​(vivas) naquele diluição conhecida. O método de contagem em placa viável é uma medida indireta da densidade celular e revela informações relacionadas apenas às bactérias vivas.

CFUs por ml de amostra = O número de colônias contadas X O fator de diluição da placa contada

No caso do exemplo acima, 150 x 1.000.000 = 150.000.000 CFUs por ml.

No final do período de incubação, selecione todas as placas de ágar contendo entre 30 e 300 colônias. Placas com mais de 300 colônias não podem ser contadas e são designadas & quotmuito numerosas para contar & quot (TNTC). Placas com menos de 30 colônias são designadas & quotmuito poucas para contar & quot (TFTC).

PROCEDIMENTO
VIABLE PLATE COUNT

Estaremos testando quatro amostras de água para a Contagem de Viabilidade. As amostras incluem:

1) água de bebedouro
2) água fervida de bebedouro
3) água do rio local
4) água fervida do rio local

Você vai precisar TABELA DE DADOS 1 para inserir seus dados e calcular o número de CFU por ml.

PROCEDIMENTO
1 )
Pegue 6 tubos de diluição, cada um contendo 9 ml de solução salina estéril.
2)
Diluir 1 ml de uma amostra retirando 1 ml da amostra e dispensando este 1 ml no primeiro tubo de diluição.
3) Usando o mesmo procedimento, retire 1 ml do primeiro tubo de diluição e dispense no segundo tubo de diluição. Posteriormente, retire 1 ml do segundo tubo de diluição e dispense no terceiro tubo de diluição. Continue fazendo isso de tubo em tubo até que a diluição seja concluída.


Figura 3.3 Diluição serial

4 ) Transfira 1 ml de cada um dos três últimos tubos de diluição para a superfície das placas de ágar correspondentes.
5 ) Incubar as placas de ágar a 37 C por 48 horas.
6 ) Escolha uma placa que pareça ter entre 30 e 300 colônias.


Figura 3.4 Enumerando uma diluição em série

7) Conte o número exato de colônias nessa placa
8) Calcule o número de CFUs por ml de amostra original da seguinte forma:

CFUs por ml de amostra = O número de colônias X A diluição fator do prato contado


Antevisão da Solução

Este material pode consistir em explicações passo a passo sobre como resolver um problema ou exemplos de redação adequada, incluindo o uso de citações, referências, bibliografias e formatação. Este material é disponibilizado com o único propósito de estudar e aprender - o uso indevido é estritamente proibido.

Sim médio
1. A mídia de teste SIM é um teste complexo de três partes que testa ao mesmo tempo a presença de sulfeto de hidrogênio, indol ou a mobilidade do microrganismo. Se não quisermos usar a porção de sulfeto do teste, podemos omitir da mídia - tiossulfato de sódio (como parte do substrato) e citrato de amônio férrico (como indicador). Os ingredientes mencionados acima são necessários para identificar a ocorrência de sulfeto de hidrogênio.

A sua ausência pode dificultar a identificação de Salmonella spp e sua diferenciação de Escherichia spp, o que nos exige muito cuidado na parte indol do teste, que então será crucial.

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Assista o vídeo: E coli on emb agar - colony morphology resultsWhy u0026 What (Janeiro 2022).