Em formação

Protocolo aberto para clonagem independente de Ligase


A Clonagem Independente de Ligase é um protocolo que permite que uma inserção seja integrada em um vetor sem ligação. Ele usa T4 DNA polimerase com apenas ATP para primeiro mastigar de volta as extremidades cegas para criar longas extremidades pegajosas e, em seguida, um tratamento de polimerase com complementos de dNTP completos para preencher o vetor.

Embora existam vários artigos e recursos interessantes que descrevam o procedimento, eu realmente gostaria de um protocolo com concentrações, temperaturas e tempo, que estou tendo problemas para encontrar. O OpenWetWare, por exemplo, tem apenas páginas stub sem detalhes. Alguém pode apontar uma receita passo a passo completa para fazer este trabalho, depois de projetar os primers?


Você pode pesquisar o conjunto Gibson ou a clonagem de extensão de polimerase circular (CPEC). Para ambos, o site do J5 tem alguns protocolos bons. Aqui está aquele para CPEC: http://j5.jbei.org/j5manual/pages/80.html

Para CPEC, você pode consultar o artigo Quan de 2011: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21293463

Espero que ajude.


Assista o vídeo: Clonagem de DNA e DNA recombinante. Biotecnologia. Biologia. Khan Academy (Novembro 2021).